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# J) T D& ?' r6 v* m5 M 中图分类号：X703 文献标识码：A 文章编号：1009－2455（200）06－0032－03& m4 f) s( f7 {, f# c6 B L5 b* n" s' d9 [
An Experimental Study on Microbiological Treatment of Lubricating Oil-Contaminated WaterLlU Qin-ya, ZHOU Hai-dong(College of Environmental and Spatial Informatics, China University of Mining and Technology, X......
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7 W2 T, p; J4 A: o 中图分类号：X703 文献标识码：A 文章编号：1009－2455（200）06－0032－033 J; L. t& ^$ B9 U
An Experimental Study on Microbiological Treatment of Lubricating Oil-Contaminated WaterLlU Qin-ya, ZHOU Hai-dong(College of Environmental and Spatial Informatics, China University of Mining and Technology, Xuzhou 221008, China) 5 |1 Z- V( Q9 q8 \
Abstract: Two strains of high-effective, lubricating oil degrading bacteria, ZL1 and ZL2, were screened out from oil-contaminated soil, which were preliminarily identified as flavobacteriun and tnicrococcus. The effects of temperature, oil content and pH value on their oil-degrading capacities were dletermined by orthogonal experiment of growth conditions. A degrading capacity experiment was carried out with an initial wastewater oil content of 270 mg/L. The experimental results showed that the oil removal rates by the strains ZL1 and ZL2 from the in-oculum in about 2 days were up to 67. 9% and 76. 2% respectively and the adaptation range of strain ZL2 to oil content and pH value was wider than that of ZL1. Key Words: lubricating oil; oil-containing wastewater; wastewater treatment; microorganism; flavobacteri-un; micrococcus
" N* u' T, Q: J2 W5 ?" R 近年来，国内外对石油及兵产品的微生物降解研究常见报道，却鲜见机油废水微生物降解方面的研究。本试验目的是通过常规微生物驯化方法，以市售机油为唯一碳源，从油污土壤中分离筛选出机油高效降解菌株，并对其生长条件及降解特性进行研究，以期进一步应用于含油污水的治理。 ! {, `# S3 G. A% o0 T
1 材料与方法 / K! U- h8 }1 r- J
1．1 土壤样品 某石油库贮油罐附近的石油污染土壤，取样3份，按含油量由多至少编为1＃，2＃，3＃。1．2 培养基 本试验选取两种无机基础培养基，（用蒸馏水配制并高压蒸气灭菌），编号分别为1＃，2＃，组成如下： 1＃基础培养基：p（KH2PO4）＝0.5g／L，ρ（K2HPO4）＝0.5g／L，P（MgSO4·7H2O）=0.2g／L，ρ（NaCl）=0.2g／L，p（CaCl2）＝0.1g／L，ρ（NH4NO3）＝1.0g／L，MnSO4痕量，FeCl3痕量。 2＃基础培养基：p（NaNO3）=2.0g／L，ρ（KH2O4）＝0．2g／L，ρ（MgSO4.7H2O）＝0.2g／L，ρ（酵母浸膏）＝1.0g／L． 含油培养基是向上述无机基础培养基中加入适量机油。固体培养基中加入质量分数为0．2％的琼脂。1．3 优势菌筛分试验1．3．1 选择富集培养 称取土样各10g，加入到500mL1＃含油培养基（含机油4mL）中，调pH值7.0，通气恒温30℃培养48h后，分别移取上述培养液5mL于45mL1＃，2＃含油培养基（含机油2mL）中，恒温30℃振荡培养。1.3.2 平板分离 制作1＃，2＃固体含油培养基平板苦干，用接种环蘸取振荡培养较好的菌液在相应平板划线，恒温30℃培养48h后平板划线分离，重复数次。选择生长状况良好的菌株进行平板扩大培养。1．4 生长条件正交试验 在保证供氧和氮、磷营养前提下，选择温度。油的质量浓度（以mg／L计）和pH值作为本次实验的三个因素进行三水平实验，方案见表1、表2。将平板培养48h的菌体刮下，5000r／min离心5min，分离得到湿菌体。向方案中每个样品加入0.5g湿菌体，培养60h后测定样品中油的质量浓度。 + j) \" F4 `7 M$ P9 i. N, ^- F7 q
表1 ZL1菌株正交试验方案及试验结果
- W6 K6 Q+ N& Z* J
2 y5 Q4 x0 V% h, d/ F4 S) R4 l: |
" `: R. F# ?- }$ g- ]! m! g8 k2 n5 Y* V5 ~3 G
7 s2 `2 g' w, E1 v9 c6 H {分组号5 F& ]8 X7 v' Q% a" G I( i3 o9 h
因素 S- }4 g+ e2 G$ f/ S
测定结果ρ（油）/（mg.L-1)
3 u( I( h: |7 s* z5 l9 {降解测量ρ（油）/（mg.L-1)5 u' l: R9 a* {/ W: L$ G
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4 l5 h) Z( {2 R5 V+ e3 J" Vρ（油）/（mg.L-1)
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" L; p7 e* m2 W& L/ |; ?* Z9 }* {% | A& j5 P
1
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424. S! ^3 W2 G8 I2 i
5.0
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2
( X7 f& L' j$ t8 ~8 T' `; T25# A; d" }& e7 k
680
, u) p$ P4 a/ {5 z7.0
3 n5 l' Y" t( P6 f5 `, ^416
( M, U) X4 v8 M- ]/ M4 `264
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25; e1 L) R# t& {) b I' s
824' Q9 b/ d( G! x' t, N# B
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7 g' F! C0 b8 G5 ?" W8 s45 L4 G) P4 o9 u( l6 y: t' v
30
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7.0
' Y6 y. l3 t9 u" K220
( _2 o5 l9 u$ M. Z7 U, e204
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! v+ p5 e; g) J& C3 A5
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$ S3 l1 p% W( y+ w. M, \: N; D; L
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5.09 G' } K# }8 J# L
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7
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424
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) p1 Q$ E, L; b. e0 H' j
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35
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5.0
9 p/ N5 ]( n* l- S a7 q569! I6 R( S& L; ]" H2 L' N
111
5 Q% O9 C! _; l1 }$ U F0 A2 `4 N' O: g6 ], Q) ^1 R* N( \! V) @: _
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0 z2 u0 x! j* \* a3 N0 L- N
2 E/ N2 r7 o' s; o, LK1) c) b% u5 e) {4 l: G
230
. S( K& g' C9 A188. Z. L `. d% q
171
& i$ j: ~$ P6 f8 b . F/ p9 ~4 |7 `
1 ~" R: Z" A; I! m: ^( B, u
4 N6 Q0 V$ c2 t& ^, WK26 d; ~! }+ a" c! m. e" t
182, e* y6 u% }4 C. z
183
5 \9 z, W, S- `/ |7 P1 v) O179' A6 V# l" a! o7 s' d
% y2 `9 x) a5 S2 h7 }* F( a8 a 3 ]; p. V) f3 {( `" i
" l6 b. X/ @. oK3
( _' q% w- ~) y% Z7 v102# x7 ]% @# |1 a* a
144
/ j- ?. Y/ I0 k7 R3 H6 U165
- F" N. P$ j+ C2 x; e" P- f# D# L. g
! A! g4 p0 s# U E4 J3 e \
6 l6 V7 o" K) C$ Z
) k& W8 r/ C. E* NR3 S0 t: b& _5 d9 _
128
9 M; b1 |! J% z; S2 \1 x0 i' F446 Z' j" w \7 `5 Z) i
14) w6 p; j" x( l/ s# ~7 s* o
" I7 Q5 A. N% n) [/ o . g8 y1 T' u/ |
表2 ZL2菌株正交试验方案及试验结果 5 j, `0 P' r, `
6 w) ~- v. i( l+ Y/ ^4 g% Z4 i4 q* M0 F( U5 ~
7 q+ c, |' L' O+ v: P: J
$ X \# D$ q- Z# A" g0 D6 c分组号! C( W8 \4 H2 @- {% f2 E9 ~8 d
因素. ^. K! b i2 y
测定结果ρ（油）/（mg.L-1)
- L$ h$ {. u \4 M降解测量ρ（油）/（mg.L-1)
" ?% K; j4 _; V/ f% Q6 ?
! Q5 I. r! x; _$ Y$ j+ r6 I* s温度/, n2 O. m( E* l7 k
ρ（油）/（mg.L-1)
2 V+ }5 U" r3 v y" ApH值
) u5 |, \! p. s) Z) ]" C
6 @! A. f' `2 n3 v5 `$ c1
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368
: x8 E6 Y) ?0 c( K4.0# N% _. z8 i6 T" X% L" B' L3 A5 g
69
: d" j. h- X, C4 c299' A1 t/ K8 y1 P9 A, e
# l! {; l ?! x2 K; u' ~% V2
& V+ i4 W0 T' l$ Q/ {25
0 u; ^0 l$ p7 f- |4 L5742 o' u7 ?7 c# y8 \. R
6.0) N6 J* G8 |( W
267
q: D1 s1 v( E2 u* P7 J6 `307
4 U6 A9 D; s& D( R+ Z5 F; M$ r3 S; @% j
3
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8.0
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288- N. C- j7 O/ P u! G3 R# ^1 {/ a
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6.0 {, { d" y5 o6 @. k6 C
3549 R; s6 U! c/ V; k- s& f2 L
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264
4 N/ q* j; g6 _5 I # F6 h( i: c, T+ k, U
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$ r, l8 T" J- e- o5 y( A: O. f73
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25, l% @' S b% I; h6 @' ~2 X
% I# w' b% b6 q) q! s; Y4 r' P * J' w+ k4 g' k8 }
1.5 降解能力试验 配制机油质量浓度为270mg／L的含油培养基1L，投入小型间歇反应器中，加入离心分离得到的湿菌体5g，通气恒温30℃培养，间隔12h取样测定其含油量。1．6 测试方法 用紫外介光光度法测定。 5 Z% u4 Y* W# I3 k
2 结果分析 3 ` a8 i ]1 X% u2 z
2．1 优势菌筛分试验 富集培养过程中，1＃土样的培养液出现的泡沫较多，乳化现象明显，菌液也较为粘稠，分离出较多的菌株，说明土壤中的石油烃能刺激石油降解菌的生长。经过选择富集培养、平板分离出4株以机油为唯一碳源的菌株，编号为ZL1，ZL2，ZL3，ZL4，性状见表3。进一步培养后筛选出降解性能较好的ZL1（1＃培养基）和ZL2（2＃培养基）进行正交试验和连续培养试验。
* @, c* I0 l4 E% g% I' h; o- s表3 4株机油降解菌形态特征 ; T% b& D' C4 Q/ X+ o- ~* U
! e9 m" ^' _* m3 ?" L$ P0 Z+ d7 w+ |9 Q) V- k1 V( u4 x& {
) ]$ s* W: Y/ \% _
9 _4 B- q2 S( B G; x2 v" H
形态特征( i9 W0 Q( w! z, E4 q7 U$ M
ZL1
) [8 o0 Y( N4 X4 X0 l \ZL2
2 y$ b9 A/ E' i AZL3 ~: o; q$ b- f2 `& K: H* b
ZL4' X: h/ r* a1 d( Y- h2 H) O9 |/ _$ U
% c& Y3 Y& |8 W5 c& w
菌落颜色9 l, q7 }# L# i0 r2 E2 ]2 q& O4 q
粉红
- h! r0 D% [1 S" W& V8 p1 h淡黄
* g( L4 k8 v9 I8 S8 {; a1 w1 e$ b+ N淡黄
6 x' T0 ?8 V6 n. s粉红, E! ~% T/ r9 j" j7 Z
- u8 y" I4 Q4 T: u
菌落形态
3 l1 A T0 y4 y. D不透明，微隆起，全缘，2 l% [7 z/ i/ [( ?. _9 j. t! D4 V. H% U
半透明，圆形
2 [7 m, t$ }/ p9 W# N: t' E9 o半透明，圆形，隆起，: K1 R( `+ |2 ^) ]( r+ G. X# ~! F
不透明，米粒状突起，
( f2 A. ]1 S, Z1 U4 O& h0 p8 `& O9 e# k4 H: y4 V2 U# d
& t* H4 K% n8 j8 y/ T! |光滑，有光泽2 T" N/ N/ F0 u+ {4 D* l% T: r
光滑，较干燥( S9 e& v K* T( u% [
光滑，有光泽) j' N) g5 b/ \
较湿润* S" C7 k9 W) A
3 ?0 D; f) K- `7 Q! t( s2 r
菌体形态1 u: I9 \; F3 q ?
短杆+ Q2 y/ e" H1 V4 E `
球形- r' L2 l3 E8 }1 a' s9 G+ |. J3 ]$ n
杆状
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菌体大小/μm4 D6 K" N! ~/ k, \& U# A: j- I" H) p
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) X" T4 E7 e3 c. z$ T革兰氏染色
* J% f7 l( ~4 @: MG7 ?1 j% l3 ?" j" H6 x& N; O' B' h. F& u3 A, X
G
" E4 y1 g8 \) e# H, ]G- R2 n4 W9 i6 {$ B% B7 \: E
G
8 s4 n8 o" U! E7 I* o+ S S, _& A
初步鉴定 P9 f3 l* q0 v& W+ S9 n
黄杆菌属! n: v! J L( m' ?
微球菌属; T0 O- l% ~) c) V
假单胞菌属
9 {* \- Z% m" m4 w( K. a酵母菌属
+ _! v" J3 R1 z2．2 生长条件正交试验 ZL1，ZL2菌株按设定的正交试验方案进行试验，测定其剩余含油量，以降解油量作为考察指标，计算结果见表2、表3。分析极差值R可以看出：ZL1菌的R温度为128，ZL2菌的R温度为73，均为最大极差值，说明温度是影响降解效果的主要因素。25℃ZL1菌降解机油能力较强；油质量浓度越低降解效果越好；pH值为7时，降解效果最好，说明ZL1菌适于在中性条件下生长。30℃ZL2菌降解机油能力较强；机油的质量浓度在368-767mg／L范围内对降解效果影响不大，以ρ（油）=574mg／L时降解效果最明显，还应进一步扩大试验的油含量范围以确定油含量对ZL2菌降解能力的影响；pH值在4－8范围内对降解效果的影响也不显著，其中PH值为6时降解效果最好，说明ZL2菌较适于在中性偏酸条件下生长。2.3 降解能力试验 向1L油质量浓度为270mg／L培养液中投加5g湿菌体进行间歇培养，考察ZLI，ZLZ菌的降解能力，结果见图1。由含油量与培养时间关系曲线可以看出：ZL1，ZL2菌被加人含油培养基后很快适应环境，随着培养时间的增长，含油量不断下降。ZL1菌在30h左右去除率达到最大，后含油量下降缓慢，到60h左右曲线趋于平直；ZL2菌在20h左右去除率达最大，48h左右曲线趋于平直。曲线说明ZL1，ZL2菌适应能力较强，ZL1菌在0－60h内生长旺盛对机油的去除率可达67．9％，ZL2菌在0－48h内生长旺盛，对机油的去除率高达76.2％，试验后期降解曲线趋于平直，含油量基本不再变化，可能是由于机油中的一些重组分难于降解的原因。 8 |, y) D l5 f* U+ S) D+ }
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3 结论 + o% Q4 l8 C9 I3 O
①石油污染土壤较适于做高效石油降解菌驯化菌源。筛选到两株高效机油降解菌ZL1，ZL2。通过正交试验得出ZL1黄杆菌属适于在25℃，油的质量浓度在424mg／L左右，中性条件下生长。ZL2微球菌属适于在 30℃，油的质量浓度在574mg/L左右，中性偏酸条件下生长。 ②温度对ZL1，ZL2菌的机油降解能力影响较大。ZL2菌的PH值、机油浓度适应范围较广，有较好的应用前景。 ③ZL1，ZL2菌对初始机油质量浓度为270mg／L培养液的去除率分别达到67.9％和76.2％，混合菌株的降解效果有待进一步研究。 . q( ]& H; x: x
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作者简介：刘勤亚（1977－），女，河北石家庄人，环境工程专业硕士在读。3 u3 N- h/ ~8 d( v9 X7 D
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狗仔卡
发表于 2010-2-21 20:12
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