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中图分类号：X703 文献标识码：A 文章编号：1009－2455（200）06－0032－03" R6 v8 E/ H% i: d
An Experimental Study on Microbiological Treatment of Lubricating Oil-Contaminated WaterLlU Qin-ya, ZHOU Hai-dong(College of Environmental and Spatial Informatics, China University of Mining and Technology, X......) t- a2 `) y1 G" o- M! v
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中图分类号：X703 文献标识码：A 文章编号：1009－2455（200）06－0032－03! G# O1 z0 W% `3 l, X2 _# l
An Experimental Study on Microbiological Treatment of Lubricating Oil-Contaminated WaterLlU Qin-ya, ZHOU Hai-dong(College of Environmental and Spatial Informatics, China University of Mining and Technology, Xuzhou 221008, China) 2 _. `1 a) h% I9 ^1 w
Abstract: Two strains of high-effective, lubricating oil degrading bacteria, ZL1 and ZL2, were screened out from oil-contaminated soil, which were preliminarily identified as flavobacteriun and tnicrococcus. The effects of temperature, oil content and pH value on their oil-degrading capacities were dletermined by orthogonal experiment of growth conditions. A degrading capacity experiment was carried out with an initial wastewater oil content of 270 mg/L. The experimental results showed that the oil removal rates by the strains ZL1 and ZL2 from the in-oculum in about 2 days were up to 67. 9% and 76. 2% respectively and the adaptation range of strain ZL2 to oil content and pH value was wider than that of ZL1. Key Words: lubricating oil; oil-containing wastewater; wastewater treatment; microorganism; flavobacteri-un; micrococcus 3 \/ k- ~3 f1 u9 d
近年来，国内外对石油及兵产品的微生物降解研究常见报道，却鲜见机油废水微生物降解方面的研究。本试验目的是通过常规微生物驯化方法，以市售机油为唯一碳源，从油污土壤中分离筛选出机油高效降解菌株，并对其生长条件及降解特性进行研究，以期进一步应用于含油污水的治理。
( C% J4 N# R$ D1 材料与方法 B: l5 j2 {5 d( C. N, n1 F
1．1 土壤样品 某石油库贮油罐附近的石油污染土壤，取样3份，按含油量由多至少编为1＃，2＃，3＃。1．2 培养基 本试验选取两种无机基础培养基，（用蒸馏水配制并高压蒸气灭菌），编号分别为1＃，2＃，组成如下： 1＃基础培养基：p（KH2PO4）＝0.5g／L，ρ（K2HPO4）＝0.5g／L，P（MgSO4·7H2O）=0.2g／L，ρ（NaCl）=0.2g／L，p（CaCl2）＝0.1g／L，ρ（NH4NO3）＝1.0g／L，MnSO4痕量，FeCl3痕量。 2＃基础培养基：p（NaNO3）=2.0g／L，ρ（KH2O4）＝0．2g／L，ρ（MgSO4.7H2O）＝0.2g／L，ρ（酵母浸膏）＝1.0g／L． 含油培养基是向上述无机基础培养基中加入适量机油。固体培养基中加入质量分数为0．2％的琼脂。1．3 优势菌筛分试验1．3．1 选择富集培养 称取土样各10g，加入到500mL1＃含油培养基（含机油4mL）中，调pH值7.0，通气恒温30℃培养48h后，分别移取上述培养液5mL于45mL1＃，2＃含油培养基（含机油2mL）中，恒温30℃振荡培养。1.3.2 平板分离 制作1＃，2＃固体含油培养基平板苦干，用接种环蘸取振荡培养较好的菌液在相应平板划线，恒温30℃培养48h后平板划线分离，重复数次。选择生长状况良好的菌株进行平板扩大培养。1．4 生长条件正交试验 在保证供氧和氮、磷营养前提下，选择温度。油的质量浓度（以mg／L计）和pH值作为本次实验的三个因素进行三水平实验，方案见表1、表2。将平板培养48h的菌体刮下，5000r／min离心5min，分离得到湿菌体。向方案中每个样品加入0.5g湿菌体，培养60h后测定样品中油的质量浓度。 & k8 g1 P; Q# ?# _# F
表1 ZL1菌株正交试验方案及试验结果 ; e( O& J4 ]5 b+ U; G4 g
2 F9 `5 h- R9 p4 |
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1 `1 N9 W" k2 S
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因素1 P+ O9 A0 u {4 O* U1 b8 v+ f
测定结果ρ（油）/（mg.L-1)
6 m1 u T- p S: N6 n降解测量ρ（油）/（mg.L-1)1 X9 ]9 y% W7 |% m( l- k+ r
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1280 |. A% a5 Y. F7 N" \
449 R; g: V9 d( R( g3 w
14- X9 D3 h) ~8 O. Z L# M
7 j: O: U8 W L
' c5 m6 G+ i$ ~" t4 W表2 ZL2菌株正交试验方案及试验结果
! l7 Y2 W0 r P* \# g9 Q& O4 \8 W! s' M0 I
8 s. @1 s# z* E( p: V0 u* h9 O; g C: b5 |/ C6 p8 k) p7 @
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8 o- e! B+ @) J9 \* L2 e! Q3 @因素
3 n, v1 y7 |$ B# Z, W5 y. A; B9 U( n测定结果ρ（油）/（mg.L-1): E5 y2 F1 N8 w7 o+ j
降解测量ρ（油）/（mg.L-1)
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6 u: k. R* J' x' q6 |, w. F# o- \' G
1.5 降解能力试验 配制机油质量浓度为270mg／L的含油培养基1L，投入小型间歇反应器中，加入离心分离得到的湿菌体5g，通气恒温30℃培养，间隔12h取样测定其含油量。1．6 测试方法 用紫外介光光度法测定。 ' T5 j8 H, S6 J4 W( G7 O
2 结果分析
9 a+ ?( T+ O) ~- d5 i0 s2．1 优势菌筛分试验 富集培养过程中，1＃土样的培养液出现的泡沫较多，乳化现象明显，菌液也较为粘稠，分离出较多的菌株，说明土壤中的石油烃能刺激石油降解菌的生长。经过选择富集培养、平板分离出4株以机油为唯一碳源的菌株，编号为ZL1，ZL2，ZL3，ZL4，性状见表3。进一步培养后筛选出降解性能较好的ZL1（1＃培养基）和ZL2（2＃培养基）进行正交试验和连续培养试验。 4 f. ` |! K; ?
表3 4株机油降解菌形态特征 * Y( l9 I9 R% [1 R% w4 `
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形态特征( c9 \( g, r" k) U% w
ZL1
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ZL3* b: o% d3 v" _" _6 n4 A
ZL43 j$ a& F+ [: S& g
. [ N) W6 {5 e4 l% O; o& _菌落颜色
) o# H& M4 U. o粉红0 M; s" l5 x2 M" [" {. i A
淡黄
5 ^1 M# J; A' @7 ?% O% F淡黄
- m# m1 j' E G. e+ X粉红
7 ?# ^" v- C' f, X* O
1 [- E7 s3 k% b" P6 _1 W菌落形态
# ?/ q# T1 k- S, b( g不透明，微隆起，全缘，0 u/ k: y+ L! ~1 [& u- J) I" q7 o
半透明，圆形
4 W6 A v, U+ p/ ~* S半透明，圆形，隆起，
. o3 ~ g1 r% s: J; j不透明，米粒状突起，# E* F( W. I6 l5 o
' J5 A& Q. B3 x9 X0 Z; k* S2 w5 Z# a " K- e& a% S- B0 R j
光滑，有光泽$ b$ O7 F1 F2 J" @2 R5 b- H
光滑，较干燥- `) s+ K6 ~- ^7 S/ p
光滑，有光泽
0 |! z- e: D- E较湿润
5 W4 q4 t$ ~4 L: P: q
a8 B1 q! T" c" v0 O) f* {2 X6 I菌体形态4 M0 | ^* }) n4 H% y
短杆
' O) c/ v* L3 ]' J球形
. \8 N. u# k1 E3 k杆状
3 S# P) \/ n% k* U2 @丝状
) ?& D) F) A6 j
! ^2 a: O7 b4 p ? w1 H# E菌体大小/μm
# X2 l: O- t- b: u% i3 i9 d（0.3-0.8)×(0.6-1.0）
. k* t4 Q4 g4 F, z9 M lΦ0.3
+ |9 ^2 L) a& |( J2 j7 C（0.5-0.8)×(1.3-5.0)
# P7 B7 h! c) T* ~4 o2 T* F. h0.2×(6-60)
7 |; M4 N" s) j, K8 s" {1 e$ B: |% E% h+ l
革兰氏染色
% f9 C4 k# E# w5 T0 g. s" s7 y8 IG
3 Q o; g7 u2 o# E% NG2 e1 M4 b. R9 e
G5 R) @/ G$ c, k
G
* i% v0 i3 X0 j6 l3 @( |( m8 I) e3 F8 v) ]- y; w0 d& S0 ?- e/ v8 @0 i
初步鉴定2 W- b' x3 n; N E9 |7 |
黄杆菌属
' Y2 r. e+ F9 C. G& ]6 B微球菌属( \2 r% l8 y' z9 o# A8 @( M7 k& `
假单胞菌属
8 i- v& {9 O. {% {% X8 ]酵母菌属
* j3 r/ I. N9 i# D- l8 s9 u2．2 生长条件正交试验 ZL1，ZL2菌株按设定的正交试验方案进行试验，测定其剩余含油量，以降解油量作为考察指标，计算结果见表2、表3。分析极差值R可以看出：ZL1菌的R温度为128，ZL2菌的R温度为73，均为最大极差值，说明温度是影响降解效果的主要因素。25℃ZL1菌降解机油能力较强；油质量浓度越低降解效果越好；pH值为7时，降解效果最好，说明ZL1菌适于在中性条件下生长。30℃ZL2菌降解机油能力较强；机油的质量浓度在368-767mg／L范围内对降解效果影响不大，以ρ（油）=574mg／L时降解效果最明显，还应进一步扩大试验的油含量范围以确定油含量对ZL2菌降解能力的影响；pH值在4－8范围内对降解效果的影响也不显著，其中PH值为6时降解效果最好，说明ZL2菌较适于在中性偏酸条件下生长。2.3 降解能力试验 向1L油质量浓度为270mg／L培养液中投加5g湿菌体进行间歇培养，考察ZLI，ZLZ菌的降解能力，结果见图1。由含油量与培养时间关系曲线可以看出：ZL1，ZL2菌被加人含油培养基后很快适应环境，随着培养时间的增长，含油量不断下降。ZL1菌在30h左右去除率达到最大，后含油量下降缓慢，到60h左右曲线趋于平直；ZL2菌在20h左右去除率达最大，48h左右曲线趋于平直。曲线说明ZL1，ZL2菌适应能力较强，ZL1菌在0－60h内生长旺盛对机油的去除率可达67．9％，ZL2菌在0－48h内生长旺盛，对机油的去除率高达76.2％，试验后期降解曲线趋于平直，含油量基本不再变化，可能是由于机油中的一些重组分难于降解的原因。 : T: @# J3 ^3 _8 ~1 @9 P
x( a% \! C2 O2 o, O3 结论
1 j, g! R+ r5 i( u3 K v/ o ①石油污染土壤较适于做高效石油降解菌驯化菌源。筛选到两株高效机油降解菌ZL1，ZL2。通过正交试验得出ZL1黄杆菌属适于在25℃，油的质量浓度在424mg／L左右，中性条件下生长。ZL2微球菌属适于在 30℃，油的质量浓度在574mg/L左右，中性偏酸条件下生长。 ②温度对ZL1，ZL2菌的机油降解能力影响较大。ZL2菌的PH值、机油浓度适应范围较广，有较好的应用前景。 ③ZL1，ZL2菌对初始机油质量浓度为270mg／L培养液的去除率分别达到67.9％和76.2％，混合菌株的降解效果有待进一步研究。 0 A% ~* c; s) E, ?+ z
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作者简介：刘勤亚（1977－），女，河北石家庄人，环境工程专业硕士在读。
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狗仔卡
发表于 2010-2-21 20:12
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